უჯრედული კულტურის დაბინძურება ეფექტურად შემცირდა

უჯრედული კულტურების დაბინძურება ადვილად შეიძლება გახდეს ყველაზე გავრცელებული პრობლემა უჯრედული კულტურის ლაბორატორიებში, რაც ზოგჯერ იწვევს ძალიან სერიოზულ შედეგებს.უჯრედული კულტურის დამაბინძურებლები შეიძლება დაიყოს ორ კატეგორიად, ქიმიურ დამაბინძურებლებად, როგორიცაა საშუალო, შრატისა და წყლის მინარევები, ენდოტოქსინები, პლასტიზატორები და სარეცხი საშუალებები და ბიოლოგიური დამაბინძურებლები, როგორიცაა ბაქტერიები, ობის, საფუარები, ვირუსები, მიკოპლაზმების ჯვარედინი ინფექცია.დაბინძურებულია სხვა უჯრედული ხაზებით.მიუხედავად იმისა, რომ შეუძლებელია დაბინძურების სრულად აღმოფხვრა, მისი სიხშირე და სიმძიმე შეიძლება შემცირდეს მისი წყაროს საფუძვლიანად გააზრებით და კარგი ასეპტიკური ტექნიკის დაცვით.

1. ამ განყოფილებაში მოცემულია ბიოლოგიური დაბინძურების ძირითადი ტიპები:
ბაქტერიული დაბინძურება
ობის და ვირუსული დაბინძურება
მიკოპლაზმით დაბინძურება
საფუარის დაბინძურება

1.1 ბაქტერიული დაბინძურება
ბაქტერიები არის ყველგან გავრცელებული ერთუჯრედიანი მიკროორგანიზმების დიდი ჯგუფი.ისინი, როგორც წესი, მხოლოდ რამდენიმე მიკრონი არიან დიამეტრით და შეიძლება იყოს სხვადასხვა ფორმის, სფეროებიდან დაწყებული ღეროებით და სპირალებით.მათი საყოველთაო, ზომისა და სწრაფი ზრდის ტემპის გამო, ბაქტერიები, საფუარებთან და ყალიბებთან ერთად, ყველაზე გავრცელებული ბიოლოგიური დამაბინძურებლებია უჯრედულ კულტურაში.

1.1.1 ბაქტერიული დაბინძურების გამოვლენა
ბაქტერიული დაბინძურება ადვილად გამოვლინდება კულტურის ვიზუალური დათვალიერებით დაინფიცირებიდან რამდენიმე დღეში;
ინფიცირებული კულტურები, როგორც წესი, მოღრუბლული (ანუ მოღრუბლული) ჩანს, ზოგჯერ თხელი ფენით ზედაპირზე.
ასევე ხშირად გვხვდება კულტურის საშუალების pH-ის უეცარი ვარდნა.
დაბალი სიმძლავრის მიკროსკოპის ქვეშ ბაქტერიები უჯრედებს შორის პაწაწინა, მოძრავი გრანულების სახით ჩნდება და მაღალი სიმძლავრის მიკროსკოპის ქვეშ დაკვირვებას შეუძლია ცალკეული ბაქტერიების ფორმების ამოხსნა.

1.2 ობის და ვირუსების დაბინძურება
1.2.1 ობის დაბინძურება
ობის არის სოკოვანი სამეფოს ევკარიოტული მიკროორგანიზმები, რომლებიც იზრდებიან მრავალუჯრედოვანი ძაფების სახით, რომელსაც ეწოდება ჰიფა.ამ მრავალუჯრედოვანი ძაფების შემაერთებელი ქსელები შეიცავს გენეტიკურად იდენტურ ბირთვებს, რომლებსაც კოლონიები ან მიცელიუმი ეწოდება.

საფუარის დაბინძურების მსგავსად, კულტურის pH რჩება სტაბილური დაბინძურების საწყის ფაზაში და შემდეგ სწრაფად იზრდება, რადგან კულტურა უფრო მძიმედ ინფიცირდება და ხდება მოღრუბლული.მიკროსკოპის ქვეშ მიცელიუმი ჩვეულებრივ ძაფისებრია, ზოგჯერ სპორების მკვრივი მტევნის სახით.მრავალი ობის სპორები შეიძლება გადარჩეს უკიდურესად მკაცრ და არასასიამოვნო გარემოში მათი მიძინებული ფაზის დროს და აქტიურდება მხოლოდ მაშინ, როცა სწორი ზრდის პირობებია.

1.2.2 ვირუსით დაბინძურება
ვირუსები არის მიკროსკოპული ინფექციური აგენტები, რომლებიც აკონტროლებენ მასპინძელი უჯრედის მექანიზმებს რეპროდუქციისთვის.მათი უკიდურესად მცირე ზომა ართულებს მათ აღმოჩენას კულტურაში და ამოღებას უჯრედული კულტურის ლაბორატორიებში გამოყენებული რეაგენტებიდან.ვინაიდან ვირუსების უმეტესობას აქვს ძალიან მკაცრი მოთხოვნები მათი მასპინძლებისთვის, ისინი ჩვეულებრივ არ ახდენენ უარყოფით გავლენას სხვა სახეობების უჯრედულ კულტურაზე, გარდა მასპინძლისა.
თუმცა, ვირუსით ინფიცირებული უჯრედული კულტურების გამოყენებამ შეიძლება სერიოზული საფრთხე შეუქმნას ლაბორატორიის პერსონალის ჯანმრთელობას, განსაკუთრებით იმ შემთხვევაში, თუ ადამიანის ან პრიმატის უჯრედები იზრდებიან ლაბორატორიაში.

ვირუსული ინფექცია უჯრედულ კულტურაში შეიძლება გამოვლინდეს ელექტრონული მიკროსკოპით, იმუნოშეღებვით ანტისხეულების ნაკრებით, ELISA ან PCR შესაბამისი ვირუსული პრაიმერებით.

1.3 მიკოპლაზმით დაბინძურება
მიკოპლაზმა არის მარტივი ბაქტერია უჯრედის კედლების გარეშე და ითვლება ყველაზე პატარა თვითგამრავლებადი ორგანიზმად.მათი უკიდურესად მცირე ზომის გამო (ჩვეულებრივ, 1 მიკრონზე ნაკლები) მიკოპლაზმის აღმოჩენა ძნელია, სანამ არ მიაღწევს უკიდურესად მაღალ სიმკვრივეს და არ გამოიწვევს უჯრედული კულტურების გაუარესებას;მანამდე, როგორც წესი, ინფექციის აშკარა ნიშანი არ არის.

1.3.1 მიკოპლაზმით დაბინძურების გამოვლენა
ზოგიერთი ნელა მზარდი მიკოპლაზმა შეიძლება შენარჩუნდეს კულტურებში უჯრედების სიკვდილის გარეშე, მაგრამ ისინი ცვლის მასპინძელი უჯრედების ქცევას და მეტაბოლიზმს კულტურაში.

ქრონიკული მიკოპლაზმური ინფექცია შეიძლება ხასიათდებოდეს შემცირებული უჯრედების პროლიფერაციის სიჩქარით, შემცირებული გაჯერების სიმკვრივით და აგლუტინაციით სუსპენზიის კულტურაში.
თუმცა, ერთადერთი საიმედო გზა მიკოპლაზმით დაბინძურების გამოსავლენად არის კულტურის რეგულარული ტესტირება ფლუორესცენტური შეღებვის გამოყენებით (მაგ., Hoechst 33258), ELISA, PCR, იმუნოშეღებვა, ავტორადიოგრაფიული ან მიკრობული ტესტირება.

1.4 საფუარის დაბინძურება
საფუარი სოკოების სამეფოს ერთუჯრედიანი ევკარიოტებია, რომელთა ზომები მერყეობს რამდენიმე მიკრონიდან (ჩვეულებრივ) 40 მიკრონიმდე (იშვიათად).

1.4.1 საფუარის დაბინძურების გამოვლენა
ისევე როგორც ბაქტერიული დაბინძურების შემთხვევაში, საფუარით დაბინძურებული კულტურები შეიძლება გახდეს მოღრუბლული, განსაკუთრებით თუ დაბინძურება მოწინავე ეტაპზეა.საფუარით დაბინძურებული კულტურების pH ძალიან მცირედ იცვლება, სანამ დაბინძურება არ გახდება უფრო მძიმე, ამ ეტაპზე pH ჩვეულებრივ იზრდება.მიკროსკოპის ქვეშ საფუარი ჩნდება როგორც ცალკეული კვერცხისებრი ან სფერული ნაწილაკები და შეიძლება წარმოქმნას უფრო მცირე ნაწილაკები.

2.ჯვარედინი ინფექცია
მიუხედავად იმისა, რომ არც ისე გავრცელებულია, როგორც მიკრობული დაბინძურება, ბევრი უჯრედული ხაზის ფართო ჯვარედინი დაბინძურება HeLa და სხვა სწრაფად მზარდი უჯრედული ხაზებით არის მკაფიოდ განსაზღვრული პრობლემა სერიოზული შედეგებით.მიიღეთ უჯრედული ხაზები რეპუტაციის მქონე უჯრედების ბანკებიდან, რეგულარულად შეამოწმეთ უჯრედული ხაზების მახასიათებლები და გამოიყენეთ კარგი ასეპტიკური ტექნიკა.ეს პრაქტიკა დაგეხმარებათ თავიდან აიცილოთ ჯვარედინი დაბინძურება.დნმ-ის თითის ანაბეჭდს, კარიოტიპს და იზოტიპს შეუძლია დაადასტუროს არის თუ არა ჯვარედინი დაბინძურება თქვენს უჯრედულ კულტურაში.

მიუხედავად იმისა, რომ არც ისე გავრცელებულია, როგორც მიკრობული დაბინძურება, ბევრი უჯრედული ხაზის ფართო ჯვარედინი დაბინძურება HeLa და სხვა სწრაფად მზარდი უჯრედული ხაზებით არის მკაფიოდ განსაზღვრული პრობლემა სერიოზული შედეგებით.მიიღეთ უჯრედული ხაზები რეპუტაციის მქონე უჯრედების ბანკებიდან, რეგულარულად შეამოწმეთ უჯრედული ხაზების მახასიათებლები და გამოიყენეთ კარგი ასეპტიკური ტექნიკა.ეს პრაქტიკა დაგეხმარებათ თავიდან აიცილოთ ჯვარედინი დაბინძურება.დნმ-ის თითის ანაბეჭდს, კარიოტიპს და იზოტიპს შეუძლია დაადასტუროს არის თუ არა ჯვარედინი დაბინძურება თქვენს უჯრედულ კულტურაში.